(推薦)生物實驗報告
在不斷進步的時代,報告的用途越來越大,不同種類的報告具有不同的用途。你所見過的報告是什么樣的呢?下面是小編整理的生物實驗報告,希望對大家有所幫助。
生物實驗報告1
一、實驗目的
(一)掌握一般培養(yǎng)基的制備原理及要求,掌握培養(yǎng)基酸堿度的測定,熟悉一
般培養(yǎng)基的制備過程和各種器皿滅菌方法。
(二)掌握細菌分離培養(yǎng)的基本要領和方法,掌握細菌抹片的制備方法和革蘭
氏染色法及油鏡的使用方法,并認識革蘭氏染色的反應特性。
(三)掌握學習用微生物學原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實驗用品
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量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
。ǘ┰噭┘安牧
肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟
三、實驗步驟
。ㄒ唬┡囵B(yǎng)基的制備
(所有用到的器皿都已121℃高壓滅菌15~30min,傾注平板在無菌操作臺內(nèi)完成,并放在無菌操作臺內(nèi))
1、麥康凱培養(yǎng)基
。1)組成:蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖
10g、0.01%結晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
。2)方法:將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中,調(diào)節(jié)
ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中,并加入乳糖,加熱熔化。將兩
液混合,分裝于燒瓶內(nèi),用紗布、扎繩等捆好后,121℃高壓滅菌
15~30min。待冷卻至50~ 55℃時,加入結晶紫和中性紅水溶液,搖勻后
傾注平板。
注:結晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。
2、血清平板
。1)組成:營養(yǎng)瓊脂、牛血清
(2)方法:將滅菌的營養(yǎng)瓊脂加熱熔化,冷卻至45~50℃時,加入牛血清,并
混勻,傾注平板。
注:不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養(yǎng)基
(1)組成:胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
(2)方法:在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉,調(diào)節(jié)ph至7.4,加熱熔化,分裝于瓶中,用紗布、扎繩等捆好后,121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時,傾注平板。
4、液體培養(yǎng)基(在lb培養(yǎng)基的基礎上,裝入大試劑瓶中,不加瓊脂,不分裝)
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在病豬死亡后,首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在,未發(fā)現(xiàn),則立即用消毒的器械對其進行生理解剖,觀察其病理特征現(xiàn)象,取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物,并注意組織的完整性,用儲物袋密封保存。
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1、消毒滅菌:操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套,再用消毒水對無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。
2、接種
。1)在無菌操作臺酒精燈旁打開用儲物袋密封保存的病料,先左手持鑷子右
手持剪刀,把病料剪出一個小口。
(2)右手持滅過菌的接種環(huán),左手持平板,并用拇指、食指及中指將平皿揭
開約20左右,然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉一下后,再用劃線接種的方法接種到一個血清平板上。
(3)用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標記,并將平板倒放。
以此方法,分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上,各接種2個血清平板。
3、培養(yǎng):將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中,反向培養(yǎng)24小時。注:劃線接種時盡量劃開,以保證長出單個菌落,且劃線時接種環(huán)應盡量傾斜,以免劃破培養(yǎng)基(后同);待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈,關閉好無菌操作臺窗口,打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。 。
(四)細菌純培養(yǎng)
1、菌落特征判斷
待粗培養(yǎng)的細菌培養(yǎng)24小時后,取出用放大鏡觀察記錄單個小菌落的形態(tài)特征并用實驗報告紙記錄好,并在平板底部上做好觀察標記,其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構造、隆起度、濕潤度、透明度、顏色等。
2、取單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢
。1)取干凈的載玻片,用記號筆在其一面做好正反面標記,再在載玻片另一
面中央滴上一小滴蒸餾水。
。2)將接種環(huán)在火焰上滅菌,待冷卻后,在酒精燈旁從標記的單個小菌落中
取少許細菌置于蒸餾水中混勻(同時蓋好平板倒扣置于一旁),用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜,再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細菌,待冷卻進行染色。
(3)先滴加草酸結晶紫溶液染色1~2min,再水洗;然后滴加革蘭氏碘液溶液
染色1~2min,再水洗;隨后滴加95%的酒精脫色30~60s,再水洗;最后滴加稀釋的品紅進行復染30~60s,再水洗;待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
。4)將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下,滴加一滴松柏油進行鏡檢,觀察其
形態(tài)特征,判斷細菌的種屬。
3、細菌接種培養(yǎng)
。1)消毒滅菌:操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套,再用消毒水對
無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。
。2)接種:右手持滅過菌的接種環(huán),左手持平板,并用拇指、食指及中指將
平皿揭開約20左右,然后將接種環(huán)插入揭開的平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標記的小菌落,再用劃線接種的方法接種到一個血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標記,將平板倒放。
。3)將接種好的平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中,反向培養(yǎng)24小時。
注:油鏡用完后應立即清理物鏡上的松柏油;劃線接種時盡量劃開,以保證長出單個菌落;待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈,關閉好無菌操作臺窗口,打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。 。
(五)菌液的制備
1、鏡檢:用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢,觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細菌。
2、分裝液體培養(yǎng)基:先對無菌操作臺及需要使用的`器械進行消毒滅菌,然后用鉗子揭開一個空試劑瓶,用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶內(nèi),并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。
3、接種:右手持接種環(huán),用火焰對其進行滅菌,待冷卻后,取出純培養(yǎng)的平板,在無菌操作臺內(nèi)酒精燈旁,蘸去少許細菌,左手傾斜液體培養(yǎng)基,將接種環(huán),伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動,然后取出對接種火焰環(huán)滅菌,并用滅菌的包裝紙捆綁好后,用記號筆做好相應標記,置于一旁。
4、培養(yǎng)搖菌:將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。注:分裝一個培養(yǎng)基就接種一個培養(yǎng)基,不得全部分裝完后再一個一個接種。
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1、保定:選擇健康的青壯年小白鼠,先用右手抓住尾巴,旋轉數(shù)周讓其眩暈,然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚,并翻轉左手,使其頭部朝下,以達到內(nèi)臟前移的目的。
2、接種:先用酒精棉球蘸取酒精對注射部位擦洗消毒,再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察:將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活,并在鼠籠處用記號筆標記好接種時間、菌種等。
4、再培養(yǎng)鑒定:待小白鼠死亡后,對其進行解剖,觀察其內(nèi)臟病變情況,并取肝臟直接涂在相應培養(yǎng)基上,在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時后,取菌落細菌進行鏡檢觀察判斷。
注:在注射小白鼠2小時候需要觀察小白鼠是否因注射時傷害到內(nèi)臟而死亡。
生物實驗報告2
【探究內(nèi)容】
探究種子萌發(fā)的環(huán)境條件
【探究目的】
。、了解種子萌發(fā)需要的環(huán)境條件。
。病W會進行探究實驗的一般方法。
【探究器材】
種子100粒、5個能蓋緊的罐頭瓶、小勺一個、餐巾紙10張、標簽紙5張
【探究過程】
提出問題:光的強弱會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?水的多少會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?溫度的高低會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?空氣的流通會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎?
做出假設:光的'強弱、水的多少、溫度的高低都會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生一定的影響。
制定計劃:準備100顆綠豆種子,5個有蓋的瓶子,10張紙巾,5張便利貼。1號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在空氣流通,有陽光的地方;2號瓶的水不但能濕透紙巾,而且能把種子淹沒,放在空氣流通,有陽光的地方;3號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,用蓋子把瓶子蓋上,使瓶子空氣不能流通;4號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在冰箱里,盡量使瓶子里的水不結冰;5號瓶不放水,放在空氣流通,有陽光的地方。
實施計劃:每天都進行實驗并觀察5個瓶子有什么變化,再把每天的變化都紀錄下來。
分析結果:1號瓶大部分能發(fā)芽;2號瓶的種子皮破了,但不能發(fā)芽;3號瓶只有少許發(fā)了芽;4號瓶和5號瓶沒有發(fā)芽
得出結論:想要種子發(fā)芽,一定要有適宜的光度;需要適量的水分,溫度也要控制好,空氣的流通也有一定的影響,但影響沒有光度、水分和溫度大,相對來說,空氣流通的影響較小。
這個實驗很簡單,我們在做實驗要分以上幾步完成,就會很容易的完成實驗。
【交流與評估】
1、根據(jù)你的問題和假設,應當將種子分成幾組?XX每組應有多少粒種子?XX每組只有一粒種子可以嗎?
2、對照組應提供的溫度、水分、空氣等條件應該如何?
3、每個實驗組的處理,除了所研究的條件外,其他環(huán)境條件是否應與對照組相同?
生物實驗報告3
一、實驗目的
1. 初步學會觀察植物細胞質(zhì)壁分離和復原的方法。
2. 理解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時,細胞液中的水分會通過原生質(zhì)層進入外界溶液,導致細胞壁和原生質(zhì)層收縮。由于原生質(zhì)層的收縮性較大,隨著細胞不斷失水,原生質(zhì)層逐漸與細胞壁分離,形成質(zhì)壁分離。當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時,外界溶液中的水分透過原生質(zhì)層進入細胞液,使原生質(zhì)層逐漸恢復原狀,植物細胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離的.復原過程。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程(見書p60)
物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1. 如果把洋蔥表皮細胞浸泡在與細胞液等滲的蔗糖溶液中,這些細胞會發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象。
2.當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象?為什么?
3.繪制一組模式圖,描述一個細胞在正常狀態(tài)下,經(jīng)過處理后的變化。首先將細胞放入0.3g/ml蔗糖溶液中處理,然后再經(jīng)過清水處理。
生物實驗報告4
一、實驗目的:
1、學會如何使用顯微鏡觀察細胞;
2、了解細胞的結構;
3、學會制作臨時裝片。
二、實驗材料:(實驗材料可換)松針、動物血液、動物神經(jīng)細胞永久裝片
三、實驗用具: 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡(物鏡5X、10X、40X)
四、方法步驟:
1、制作松針的臨時切片:
。1)取干凈的載玻片一個平置于試驗臺上,用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
。2)將土豆切成條狀(截面約:0.5X0.5cm)取兩條,將一根松針夾在兩個土豆條之間,用刀片削成盡量薄的薄片,削時,手腕不動,靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片,置于載玻片的水滴上。
。3)從一側輕輕蓋上蓋玻片,不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴,即完成臨時切片的'制作。
2、觀察切片:
。1)取出顯微鏡,置于試驗臺上靠左的位置,打開光源。
。2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺上,調(diào)整載物臺位置,使蓋玻片對準光源。
。3)使用5X物鏡觀察切片,使松針切片在視野中心,換成10X物鏡,觀察松針葉面橫切結構。
(4)換成40X物鏡觀察,注意細胞及細胞內(nèi)物質(zhì)結構,畫圖。
3、動物血液臨時裝片的制作及觀察(除了不用切片,其他類似)
4、 動物神經(jīng)細胞永久裝片的觀察。
五、反思:
1、松針的葉面結構是什么樣的?
2、動物細胞的結構是什么樣的?與植物細胞又什么不同?
3、顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大,視野的亮度如何?物體的大小如何?
4、如何調(diào)節(jié)焦距?
5、如何才能使切片盡量的薄?切片的厚薄對顯微鏡下觀察的效果有什么影響。
生物實驗報告5
一、實驗目的
1、觀察植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期。
2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。
3、初步掌握繪制生物圖的方法。
二、實驗原理
在植物體中,有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞,高等植物細胞有絲分裂的過
程,分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期?梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細胞的
有絲分裂的過程,根據(jù)各個時期細胞內(nèi)染色體(或染色質(zhì))的變化情況,識別該細胞處于有
絲分裂的哪個時期,細胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料著色。
三、材料用具
洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質(zhì)量分數(shù)為15%的'鹽酸、
體積分數(shù)為95%的酒精、質(zhì)量分數(shù)為0.01g/ml的龍膽紫(或紫藥水)
四、實驗過程(見書P39)
1、洋蔥根尖的培養(yǎng)(提前3—4天)
2、解離:5min
3、漂洗:10min
4、染色:5min
5、制片
6、鏡檢
五、注意
1、解離充分是實驗成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細胞也不會重疊。
2、漂洗時間一定要足夠,否則細胞染不上色。
3、染色時,染液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深,否則鏡下一片紫色,無法觀察。
六、討論
1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關鍵是什么?談談你自己的體會。
2、在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后,繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖,并標明時期。
生物實驗報告6
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞:顯微鏡、洋蔥表皮細胞切片,及其他細胞裝片。
一、目的:在實驗過程中為學生提供多種細胞裝片,以供學生操作、觀察,增加了學生動手實驗的時間,使學生在實驗中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程,從而熟練掌握教學教學顯微鏡的使用方法。
二、步驟:
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座,把顯微鏡向著光放在實驗臺上。
2、對光:轉動轉換器,使低倍物鏡對準通光孔。
3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡,從目鏡往下看,能看見亮的光圈。
4、觀察:調(diào)節(jié)粗準焦螺旋,把所要觀察的.洋蔥表皮切片放在載物臺上,用壓片夾夾住,標本要正對通光孔的中央。
5、左眼向目鏡內(nèi)看,同時轉動粗準焦螺旋等,直到看清切片上的細胞為止,最后整理器材。
三、注意事項:
1、取送顯微鏡時,應右手握住鏡臂,左手托住鏡座,輕拿輕放。
2、鏡檢時,坐姿端正,一般用左眼觀察物象,用右眼看著實驗報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。
3、切忌一面從目鏡進行觀察,一面使鏡筒下降,這樣容易使物鏡與玻片標本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時,切勿使用粗調(diào)節(jié)器,以免壓壞標本,損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒,移開鏡頭后再取出玻片標本,以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。
生物實驗報告7
一、實驗目的
了解細胞膜[1]的滲透性及各類物質(zhì)進入細胞的速度[2]
二、實驗原理
1、在等滲溶液中,細胞對各種溶質(zhì)的透過性不同。有的溶質(zhì)可以進入,有的溶質(zhì)不能滲入。
2、滲入的溶質(zhì)能提高細胞的滲透壓,促進水分子進入細胞,引起溶血現(xiàn)象[3]。
3、不同的溶質(zhì)滲入到細胞內(nèi)的速度不同,因此溶血時間也不同。
三、實驗材料
新鮮血液(雞血、豬血、牛血等)
四、實驗器材
試管(1.5cmX18cm)、試管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml燒杯(2個)、250ml容量瓶、移液槍、膠頭滴管、菜刀、吸球、電子天平、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、秒表
五、實驗藥品及試劑
0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸銨、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝劑[4]
六、實驗步驟
1、制備血液稀釋液
(1)抗凝劑的制備:首先稱取1克肝素鈉粉末,然后加入0.17MNaCl溶液10ml(1∶10的比例),混合均勻,制成肝素抗凝劑。
(2)血液稀釋液的制備:取新鮮血液,按比例(肝素抗凝劑:血液=1∶10)混合均勻,配制成經(jīng)肝素抗凝的血液[5][6]。
。3)按比例(經(jīng)肝素抗凝的血液∶0.17MNaCl溶液=1∶10)混合均勻,形成一種不透明的紅色液體[7]。
2、低滲溶液(空白對照)的觀察
取試管一只,加入10ml蒸餾水,然后再加入1ml稀釋的血液。注意觀察溶液顏色的`變化。結果是溶液由不透明的紅色變?yōu)槌吻。記錄下這個過程所要的時間。
3、紅血球的滲透性
按表一的配制,分別在下列十種等滲溶液中進行實驗。輕輕搖動,注意有無顏色變化,是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生,記下時間(自加入稀釋血液到溶液逐漸由紅色變?yōu)橥该鞒吻,紅血球全部溶血所需時間),填入表一的空格中。
4、顯微觀察
[1]何為細胞膜?[5]注意:這一步,動作要非常迅速,否則雞血會凝固;蛘呦劝芽鼓齽┘尤氲綗,再加入新鮮的[2]雞血,邊加邊震蕩即可。為何不同物質(zhì)進入細胞的速度不同?[6]為什么新鮮的雞血會凝固?[3]何為溶血現(xiàn)象?[7]為什么這一步要使用0.17M的NaCl溶液?[4]你知道有哪些血液抗凝劑?
。1)血液紅細胞的觀察
滴一滴稀釋的血液于載玻片上,蓋上蓋玻片。用光學顯微鏡觀察細胞的種類、形狀和顏色。
(2)細胞破碎的觀察
在上一步的載玻片的一端滴加清水,在另一端吸水,并在顯微鏡下觀察細胞的破裂。
七、實驗結果與分析
1、比較和分析你所觀察到的實驗結果,并解釋原因。
結果:
。1)在所提供的試劑中不溶血的有:
。2)在所提供的試劑中不完全溶血的有:
。3)在所提供的試劑中完全溶血的有:
結果分析與比較:結論:
2、繪制你所觀察到的血液細胞圖。
3、討論溶血實驗在研究中應用的可能性。
生物實驗報告8
實驗名稱:
觀察洋蔥表皮細胞。
實驗目的:
1、學習制作洋蔥表皮玻片標本。
2、學會使用顯微鏡觀察洋蔥表皮,用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細胞。
3、對比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實驗重點:
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。
實驗難點:
正確使用顯微鏡。
實驗準備:
分組實驗器材:顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。 實驗過程:
一、導入課題
出示洋蔥。問:如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊,用顯微鏡來觀察能看到些什么呢?(板書課題)
二、制作洋蔥表皮玻片標本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標本的方法與步驟。
(1)在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水;
。2)用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個“井”字,用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央,注意標本要平展開,不能折疊;
(3)用蓋玻片傾斜著蓋到標本上面,放蓋玻片時,先放一端,再慢慢放下另一端,注意不要有氣泡。如水不足,可沿蓋玻片邊緣滴加;若水分過多,可用吸水紙吸掉;
。4)從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒,并把玻片微微傾斜,再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水;
。5)洋蔥表皮玻片標本做成可進行觀察。
2、學生以組為單位自制玻片標本(最好制三份裝片,便于下面的對比觀察),教師巡視指導(教育學生注意安全)。
三、觀察洋蔥表皮細胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫在科學記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫到科學記錄本上。
3、學生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么?它們有何不同?
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。
(1)、出示顯微鏡,引導學生認識顯微鏡,簡介各部分的名稱、功能及使用方法,學生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
。2)、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。(師操作演示:安放――對光――上片――調(diào)焦――觀察。生一步步跟著操作。)
(3)、學生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細胞。教師巡視指導,各組的實驗組長監(jiān)督組員操作是否規(guī)范,要求每個人都要操作、都要觀察,并將觀察結果進行交流。組長將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。
(1)各組推薦發(fā)言代表談自己的發(fā)現(xiàn)。
。2)各組將所畫的觀察結果向全班展示。
(3)交流討論評價。
6、師小結:我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的.細節(jié)更多,更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個個比較規(guī)則的多邊形組成的,而且大多呈長方形,外為細胞壁,內(nèi)為無色細胞質(zhì)和細胞核。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結構,就是洋蔥的細胞。(師一邊描述一邊畫洋蔥細胞簡圖)
四、實驗結束。
回收實驗器材,整理實驗桌。
生物實驗報告9
質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測
姓名:XXX學號:2011001400XX年級:20xx級生物基地班 實驗日期:20xx年9月16日—30日組別:6組 同組者:XX
一、【實驗目的】
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。
2、學習并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。
3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學習并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實驗原理】
1、質(zhì)粒DNA的制備方法
質(zhì)粒(Plasmid)是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子,分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中,但在細菌細胞中含量最多。細菌質(zhì)粒大小介于1~200Kb之間,是應用最多的質(zhì)粒類群,在細菌細胞內(nèi)它們利用宿主細胞的復制機構合成質(zhì)粒自身的DNA。
質(zhì)粒DNA的制備包括3個步驟:①培養(yǎng)細菌,使質(zhì)粒DNA大量擴增;②收集和裂解細菌;③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括:堿裂解法:0。2molNaOH+1%SDS;煮沸裂解法:沸水煮沸40秒;SDS裂解法:10%SDS,一般用于質(zhì)粒大量提取。在實際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質(zhì)粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。
2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法
在細菌細胞中,染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來,但是兩者變性與復性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達12。0的堿性溶液中,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性;共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂,但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用pH值4。6的KAc(NaAc)高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時,變性的質(zhì)粒DNA可恢復原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結構而溶解于溶液中;但染色體DNA不能復性,而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心,與復性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA,可用無水乙醇和鹽溶液,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似,乙醇沉淀
DNA的同時,也伴隨著RNA沉淀,可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通過酚/氯仿抽提除去,最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。
3、凝膠電泳進行DNA分離純化
電泳(electrophoresis)是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下,可以解離成帶電荷的離子,在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì),它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中,其中的電離子會發(fā)生移動,移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異,就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而,凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段,是分子生物學的核心技術之一。
凝膠電泳技術操作簡單而迅速,分辨率高,分辨范圍廣。此外,凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠(ethidium bromide,EB)或SYBR Gold染色直接觀察到,甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話,這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收,用于各種各樣目的`的實驗。
分子生物學中,常用的兩種凝膠為瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑,也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,使用于較小分子核酸(5—500bp)的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高,長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離,這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳,并能容納較大的DNA上樣量,但是與瓊脂糖凝膠相比,在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物,由β—D—吡喃半乳糖與3,6—脫水—L—吡喃半乳糖組成,相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右,即可溶化形成清亮、透明的液體,澆在模版上冷卻后形成凝膠,其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低,但它的分離范圍更大(50至百萬bp),小片段DNA(50—20000bp)最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作,適用于核酸電泳,測定DNA的相對分子質(zhì)量,分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段,進一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中,由于核酸有磷酸基而帶有負電荷,在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素:樣品DNA分子的大小、DNA分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。
三、【實驗材料】
1、實驗儀器
培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管(Eppendorf管)、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。
2、實驗試劑
LB培養(yǎng)基,抗生素Ap(氨芐青霉素),溶液Ⅰ,溶液Ⅱ,溶液Ⅲ,RNaseA母液,TE緩沖液,飽和酚,氯仿/異戊醇混合液,酚/氯仿/異戊醇(PCI)混合液,預冷無水乙醇,TAE電泳緩沖液(10×),上樣緩沖液(6×),瓊脂糖,溴化乙錠(EB),DNA相對分子質(zhì)量標準物DNA Marker λ/Hind Ⅲ,5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。
四、【實驗步驟】
1、準備實驗
配制LB液體培養(yǎng)基,分裝到100ml的三角瓶中20ml,300ml的三角瓶中50ml,另配LB固體培養(yǎng)基;準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒,1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中,50ml離心管2個 ,將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。
2、菌體培養(yǎng)
在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落,接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng),培養(yǎng)基中加Ap100ul
。100ug/ml),質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因,使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大,雜質(zhì)較多,然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉接于50mlLB液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基中加入Ap250ul,37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期,生長速率快,代謝旺盛,酶系活躍,雜質(zhì)少,適合提取質(zhì)粒。
3、質(zhì)粒提取
(1)稱量空的50ml離心管的重量為14。331g,然后將三角瓶中的菌液倒至管中,不能倒?jié)M,液面距管口約1cm,7000rpm離心5分鐘后棄去上清液,收集菌體細胞。
。2)向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌,用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻,同步驟(1)離心,棄去上清,將離心管倒置于吸水紙上,使上清液全部流盡干燥,然后稱重得14。437g,則菌體質(zhì)量為106mg。
。3)洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液Ⅰ1ml,106mg菌體按100mg菌體處理,加入溶液Ⅰ1ml,打散菌泥、吹吸混勻,冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加,懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部;維持滲透壓,防止細胞提前破裂,防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,可抑制DNase的活性,抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當?shù)膒H。
。4) 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml(與溶液Ⅰ對應),輕加輕搖,冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細胞膜發(fā)生了從bilayer(雙層膜)結構向micelle(微囊)結構的相變化導致細胞溶解。同時,強堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性;SDS為下一步沉淀做鋪墊。
。5)按比例加入冰預冷的溶液Ⅲ1。5ml(與溶液Ⅰ、Ⅱ對應),輕加輕搖,冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA,只要是50-100 kb大小的片斷,就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質(zhì)粒DNA復性。反應形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。
。6)12000rpm離心15min,白色沉淀聚集在離心管一側,用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻,加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
(7) 以12000rpm離心15min,小心倒去上清液,得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇,輕輕地覆蓋沉淀,不打散沉淀,洗滌一次。
。8)以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液,將離心管上沉淀部位做好標記,將離心管倒置于吸水紙上,干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色,隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒,要在離心管上標記質(zhì)粒所在位置。
(9)將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中,移液槍吹吸助溶,然后將溶解液轉移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液,為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài),呈弱堿性,有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑,抑制DNA酶作用。
4、質(zhì)粒純化
(1)Eppendorf管中加入RNase A(純濃度>50ug/ml),37℃保溫0。5—1h
(2)將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中,每管0。5ml,分別加入與溶液等體積的(500ul)Tris飽和苯酚溶液,振蕩混勻,7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的,顯黃色。苯
酚加入后,溶液分層,苯酚向下,下層呈淺黃色,上層溶液無色,在中間產(chǎn)生大量白色沉淀,此為變性后的蛋白質(zhì)。
。3)加入等體積的(500ul)苯酚/氯仿溶液(1:1),振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑,但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響DNA的酶切,它本身易被氧化,會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑,但是比酚弱,且能溶解質(zhì)粒中的脂類,溶解苯酚,去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫,有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀,但仍有蛋白質(zhì)的存在。
。4)加入等體積的氯仿溶液,振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中,得上清液400ul。
。5)向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻,再加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。
。6)以12000rpm,離心15min,棄去上清液,得到DNA沉淀,為白色。
(7)向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul,不打散沉淀,洗滌。然后以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。
。8)去掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質(zhì)粒檢測
。1)稱取0。4g的瓊脂糖,置于一錐形瓶中,在三角瓶上標好液面位置,加入40ml的1×TAE電泳緩沖液,再加入5—10ml重蒸水,以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化,溶液透明。冷卻至50℃左右,倒入制板槽制板。
。2)待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上,用移液槍混勻。
。3)電泳1h,觀察溴酚蘭的帶(藍色)的移動。
(4) 把膠槽取出,小心滑出膠塊,放進EB溶液中進行染色,完全浸泡約5min。
(5)凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項】
。1)滴加溶液II時,要逐滴加入,且要輕加輕搖溶液使之混勻,整體動作要快,因為強堿在溶液中停留時間不能過長,否則會破壞質(zhì)粒DNA。
。2)加入溶液III后,生成了大量的絮狀沉淀,溶液III中和強堿使質(zhì)粒復性,不可劇烈震蕩, 防止染色體DNA斷裂,應該上下顛倒離心管,使其混勻。
生物實驗報告10
實驗生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定
一、實驗目的
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實驗原理
1.還原糖的鑒定原理生物組織中普遍存在的還原糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(游離醛基或游離酮基),因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否,而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下:
CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色棕色磚紅色(沉淀)。
2.蛋白質(zhì)的鑒定原理鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的`成分是質(zhì)量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01 g/mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此,蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應。
3.脂肪的鑒定原理脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色,被蘇丹Ⅳ 染成紅色
三、實驗過程(見書P18)
四、實驗用品(見書P18)
五、注意
1.關于鑒定還原糖的實驗,在加熱試管中的溶液時,應該用試管夾夾住試管上部,并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部,同時試管口不要朝向實驗者,以免試管內(nèi)溶液沸騰時沖出試管,造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰,可以上提試管夾,使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用,切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3.蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A,再加雙縮脲B
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么?
生物實驗報告11
一、實驗目的
1.初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。
2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。
二、實驗原理
淀粉和蔗糖都是非還原糖,它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖,還原糖能夠與斐林試劑發(fā)生氧化還原反應,生成磚紅色的'氧化亞銅沉淀。
用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液,再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖,就可以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。
三、材料用具
滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網(wǎng)、酒精燈、燒杯、質(zhì)量分數(shù)為2%的新鮮淀粉酶溶液、質(zhì)量分數(shù)為3%的可溶性淀粉溶液、質(zhì)量分數(shù)為3%的蔗糖溶液、斐林試劑
四、實驗過程
。ㄒ姇47)
五、討論
1.制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么?
。.兩支試管保溫時,為什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?
3.如果2號試管也產(chǎn)生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的?
生物實驗報告12
實驗一觀察DNA和RNA在細胞中的分布
實驗原理:DNA綠色,RNA紅色
分布:真核生物DNA主要分布在細胞核中,線粒體和葉綠體內(nèi)也含有少量的DNA;RNA主要分布在細胞質(zhì)中。
實驗結果:細胞核呈綠色,細胞質(zhì)呈紅色。
實驗二物質(zhì)鑒定
還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀
脂肪+蘇丹III橘黃色
脂肪+蘇丹IV紅色
蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色反應
1、還原糖的檢測
(1)材料的選。哼原糖含量高,白色或近于白色,如蘋果,梨,白蘿卜。
(2)試劑:斐林試劑(甲液:0.1g/mL的NaOH溶液,乙液:0.05g/mL的CuSO4溶液),現(xiàn)配現(xiàn)用。
(3)步驟:取樣液2mL于試管中→加入剛配的斐林試劑1mL(斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入)→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化(白色→淺藍色→磚紅色)
★模擬尿糖的檢測
1、取樣:正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、檢測方法:斐林試劑(水浴加熱)或班氏試劑或尿糖試紙
3、結果:(用斐林試劑檢測)試管內(nèi)發(fā)生出現(xiàn)磚紅色沉淀的是糖尿病患者的尿液,未出現(xiàn)磚紅色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析:因為糖尿病患者的尿液中含有還原糖,與斐林試劑發(fā)生反應產(chǎn)生磚紅色沉淀,而正常人尿液中無還原糖,所以沒有發(fā)生反應。
2、脂肪的檢測
(1)材料的選取:含脂肪量越高的組織越好,如花生的子葉。
(2)步驟:制作切片(切片越薄越好)將最薄的花生切片放在載玻片中央
染色(滴蘇丹Ⅲ染液2~3滴切片上→2~3min后吸去染液→滴體積分數(shù)50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)
制作裝片(滴1~2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片)
鏡檢鑒定(顯微鏡對光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒)
3、蛋白質(zhì)的檢測
(1)試劑:雙縮脲試劑(A液:0.1g/mL的NaOH溶液,B液:0.01g/mL的CuSO4溶液)
(2)步驟:試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL,搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴,搖勻→觀察顏色變化(紫色)
考點提示:
(1)常見還原性糖與非還原性糖有哪些?
葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
(2)還原性糖植物組織取材條件?
含糖量較高、顏色為白色或近于白色,如:蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。
(3)研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對實驗有何影響?
加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少,使鑒定時溶液顏色變化不明顯。
(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?為何要現(xiàn)混現(xiàn)用?
混合后使用;產(chǎn)生氫氧化銅;氫氧化銅不穩(wěn)定。
(5)還原性糖中加入斐林試劑后,溶液顏色變化的順序為:淺藍色棕色磚紅色
(6)花生種子切片為何要薄?只有很薄的切片,才能透光,而用于顯微鏡的觀察。
(7)轉動細準焦螺旋時,若花生切片的細胞總有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?切片的厚薄不均勻。
(8)脂肪鑒定中乙醇作用?洗去浮色。
(9)雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用?先加A液的目的。怎樣通過對比看顏色變化?
不能混合;先加A液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對比。
實驗三觀察葉綠體和細胞質(zhì)流動
1、材料:新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉,口腔上皮細胞臨時裝片
2、原理:葉綠體在顯微鏡下觀察,綠色,球形或橢球形。
用健那綠染液染色后的口腔上皮細胞中線粒體成藍綠色,細胞質(zhì)接近無色。
知識概要:
取材制片低倍觀察高倍觀察
考點提示:
(1)為什么可直接取用蘚類的小葉,而不能直接取用菠菜葉?
因為蘚類的小葉很薄,只有一層細胞組成,而菠菜葉由很多層細胞構成。
(2)取用菠菜葉的下表皮時,為何要稍帶些葉肉?
表皮細胞除保衛(wèi)細胞外,一般不含葉綠體,而葉肉細胞含較多的葉綠體。
(3)怎樣加快黑藻細胞質(zhì)的流動速度?最適溫度是多少?進行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。
(4)對黑藻什么部位的細胞觀察,所觀察到的細胞質(zhì)流動的現(xiàn)象最明顯?葉脈附近的細胞。
(5)若視野中某細胞中細胞質(zhì)的流動方向為順時針,則在裝片中該細胞的.細胞質(zhì)的實際流動方向是怎樣的?仍為順時針。
(6)是否一般細胞的細胞質(zhì)不流動,只有黑藻等少數(shù)植物的細胞質(zhì)才流動?
否,活細胞的細胞質(zhì)都是流動的。
(7)若觀察植物根毛細胞細胞質(zhì)的流動,則對顯微鏡的視野亮度應如何調(diào)節(jié)?
視野應適當調(diào)暗一些,可用反光鏡的平面鏡來采光或縮小光圈。
(8)在強光照射下,葉綠體的向光面有何變化?葉綠體的受光面積較小有一面面向光源實驗四觀察有絲分裂。
1、材料:洋蔥根尖(蔥,蒜)
2、步驟:
(一)洋蔥根尖的培養(yǎng)
(二)裝片的制作
制作流程:解離→漂洗→染色→制片
1.解離:藥液:質(zhì)量分數(shù)為15%的鹽酸,體積分數(shù)為95%的酒精(1:1混合液)。時間:3~5min.目的:使組織中的細胞相互分離開來。
2.漂洗:用清水漂洗約10min.目的:洗去藥液,防止解離過度,并有利于染色。
3.染色:用質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~5min。目的:使染色體著色,利于觀察。
4.制片:將根尖放在載玻片上,加一滴清水,并用鑷子把根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片上再加一片載玻片。然后用拇指輕輕地按壓載玻片。目的:使細胞分散開來,有利于觀察。
(三)觀察
1、先在低倍鏡下找到根尖分生區(qū)細胞:細胞呈正方形,排列緊密,有的細胞正在分裂。
2、換高倍鏡下觀察:分裂中期→分裂前、后、末期→分裂間期。(注意各時期細胞內(nèi)染色體形態(tài)和分布的特點)。其中,處于分裂間期的細胞數(shù)目最多。
考點提示:
(1)培養(yǎng)根尖時,為何要經(jīng)常換水?增加水中的氧氣,防止根進行無氧呼吸造成根的腐爛。
(2)培養(yǎng)根尖時,應選用老洋蔥還是新洋蔥?為什么?應選用舊洋蔥,因為新洋蔥尚在休眠,不易生根。
(3)為何每條根只能用根尖?取根尖的時間是何時?為何?
因為根尖分生區(qū)的細胞能進行有絲分裂;上午10時到下午2時;因為此時細胞分裂活躍。
(4)解離和壓片的目的分別是什么?壓片時為何要再加一塊載玻片?解離是為了使細胞相互分離開來,壓片是為了使細胞相互分散開來;再加一塊載玻片是為了受力均勻,防止蓋玻片被壓破。
(5)若所觀察的組織細胞大多是破碎而不完整的,其原因是什么?壓片時用力過大。
(6)解離過程中鹽酸的作用是什么?丙酮可代替嗎?分解和溶解細胞間質(zhì);不能,而硝酸可代替。
(7)為何要漂洗?洗去鹽酸便于染色。
(8)細胞中染色最深的結構是什么?染色最深的結構是染色質(zhì)或染色體。
(9)若所觀察的細胞各部分全是紫色,其原因是什么?
染液濃度過大或染色時間過長。
(10)為何要找分生區(qū)?分生區(qū)的特點是什么?能用高倍物鏡找分生區(qū)嗎?為什么?
因為在根尖只有分生區(qū)的細胞能夠進行細胞分裂;分生區(qū)的特點是:細胞呈正方形,排列緊密,有的細胞處于分裂狀態(tài);不能用高倍鏡找分生區(qū),因為高倍鏡所觀察的實際范圍很小,難以發(fā)現(xiàn)分生區(qū)。
(11)分生區(qū)細胞中,什么時期的細胞最多?為什么?間期;因為在細胞周期中,間期時間最長。
(12)所觀察的細胞能從中期變化到后期嗎?為什么?
不能,因為所觀察的細胞都是停留在某一時期的死細胞。
(13)觀察洋蔥表皮細胞能否看到染色體?為什么?不能,因為洋蔥表皮細胞一般不分裂。
(14)若觀察時不能看到染色體,其原因是什么?
沒有找到分生區(qū)細胞;沒有找到處于分裂期的細胞;染液過稀;染色時間過短。
生物實驗報告13
實驗名稱:
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細胞質(zhì)流動
一、實驗目的
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實驗原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的.光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細胞中的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),觀察細胞質(zhì)的流動,可以用細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運動做為標志。
三、材料用具
蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆
四、實驗過程(見書P30)
1.制作蘚類葉片的臨時裝片
2.用顯微鏡觀察葉綠體
3.制作黑藻葉片臨時裝片
4.用顯微鏡觀察細胞質(zhì)流動
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五、討論
1.細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動,為什么?
2.葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關系?
3.植物細胞的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),這對于活細胞完成生命活動有什么意義?
4.用鉛筆畫一個葉片細胞,標出葉綠體的大致流動方向。
生物實驗報告14
實驗日期: 年月 日
組長: 組員:
一、實驗要求
1、練習使用顯微鏡,學習規(guī)范的操作方法。
2、能夠獨立操作顯微鏡。
3、能夠將玻片標本移動到視野中央,并看到清晰的圖像。
二、實驗原理
三、材料用具
顯微鏡,寫有“上”字的玻片,動物、植物玻片標本,擦鏡紙,紗布。
四、方法與步驟
。ㄒ唬┤$R和安放
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座
2、把顯微鏡放在實驗臺上,略偏左。安裝好目鏡和物鏡。
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3、轉動轉換器,使低倍物鏡對準通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。
4、把一個較大的光圈對準通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開,便于以后同時畫圖)。轉動反光鏡,使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡,以看到白亮的'視野。
。ㄈ┯^察
5、把所要觀察的玻片標本(也可以用印有“e”字的薄紙片制成)放在載物臺上,用壓片夾壓住,標本要正對通光孔的中心。
6、轉動粗準焦螺旋,使鏡筒緩緩下降,直到物鏡接近玻片標本為止(眼睛看著物鏡,以免物鏡碰到玻片標本)。
7、左眼向目鏡內(nèi)看,同時反方向轉動粗準焦螺旋,使鏡筒緩緩上升,直到看清物像為止。再略微轉動細準焦螺旋,使看到的物像更加清晰。
注意事項:
1、實驗完畢,把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉動轉換器,把兩個物鏡偏到峽谷旁。最后把顯微鏡放進鏡箱里,
生物實驗報告15
為了加強我院醫(yī)院病原微生物實驗室的生物安全管理工作,確保實現(xiàn)醫(yī)院的安全目標,我院檢驗科根據(jù)xxxx省《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的相關規(guī)定,對醫(yī)院實驗室的安全管理工作進行了自查。我們還針對涉及病原微生物菌(毒)種及樣本的人員進行了培訓,提高他們的生物安全意識,并確保他們掌握必要的生物安全知識。
一、實驗室生物安全管理工作、各項規(guī)章制度的運行情況
醫(yī)院檢驗科注重學習和遵守《病原微生物實驗室生物安全管理條例》,并定期對生物安全各項規(guī)章制度的運行情況進行檢查和整改。實驗室嚴格遵守國家標準、實驗室技術規(guī)范和操作規(guī)程,并指派專人監(jiān)督檢查其落實情況。同時,詳細記錄檢查情況,并定期召開會議討論發(fā)現(xiàn)的問題,并及時糾正。
二、病原微生物菌(毒)種的管理及運輸
由于目前我院的相關條件存在限制,暫時無法開展病原微生物實驗室生物的檢查。為了滿足通知要求,我們積極組織相關人員學習了以下內(nèi)容:嚴格管理病原微生物實驗室菌(毒)種的登記制度,一旦收到菌(毒)種后立即進行編號登記,并詳細記錄菌(毒)種的名稱、來源、特性、用途、批號、傳代日期和數(shù)量。在菌(毒)種的管理過程中,包括安全保衛(wèi)制度、安全保衛(wèi)措施和保管過程中的傳代、分發(fā)和使用,都需要及時進行登記,同時定期核對庫存數(shù)量。在銷毀菌(毒)種時,還需進行滅菌指示標志和滅菌效果的登記,并做好銷毀過程的記錄。
三、實驗室生物安全突發(fā)事件的處理工作
在本次自我檢查中,我們實驗室對之前制定的應急指揮和處置體系進行了修訂,以更好地滿足實際工作的需求。
當遭遇自然災害(例如地震、水災等)或設施故障時,我們制定了針對可能出現(xiàn)的緊急情況的處理原則和應對措施。
同時規(guī)范了菌(毒)種外溢在臺面、地面和其他表面的的處理原則、皮膚刺傷(破損)的.處理原則、離心管發(fā)生破裂的處理原則并建立了意外事故報告制度。
我們在實驗室的醒目位置貼出了一份聯(lián)系電話列表,方便大家隨時獲取相關部門的聯(lián)系方式。這份列表包括實驗負責人、實驗室工作人員、消防部門、醫(yī)院、公安機關、工程技術人員、以及水、電氣維修部門的電話號碼。
四、提高意識,加強學習
組織檢驗人員對《病原微生物實驗室生物安全管理條例》進行全面系統(tǒng)的學習,同時加強了實驗室的準入制度的管理,標明實驗室類型、負責人及其聯(lián)絡方式。加強了個人安全防護。
經(jīng)過此次對微生物實驗室生物安全管理工作的自查,我們?nèi)w檢驗人員對該工作的重要性有了更深刻的認識。為加強管理,確保實驗室工作的安全,我們采取了有效措施。
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